E.Z.N.A.® Endo-Free Plasmid Mini Kit I 從培養(yǎng)過(guò)夜的菌液(1-5ml)中提取低內(nèi)毒素的質(zhì)粒DNA 內(nèi)毒素(Endotoxin)是革蘭氏陰性菌細(xì)胞壁上的一種脂多糖，它能引起哺乳動(dòng)物發(fā)熱，甚至?xí)?dǎo)致動(dòng)物休克。常規(guī)的質(zhì)粒純化試劑盒由于無(wú)法去除內(nèi)毒素的污染，從而大大降低了質(zhì)粒轉(zhuǎn)染的效率。Omega公司采用獨(dú)特的內(nèi)毒素吸附緩沖液(ETR Buffer)，能有效去除質(zhì)粒中的內(nèi)毒素污染，純化的質(zhì)粒中內(nèi)毒素含量小于0.1EU/µg，可大大提高轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)效率和動(dòng)物注射效果。從培養(yǎng)過(guò)夜的菌液中收集細(xì)菌后，采用經(jīng)典的堿裂解法裂解細(xì)菌，離心去除染色體DNA和蛋白質(zhì)，得到含有質(zhì)粒和內(nèi)毒素的上清液，加入Buffer ETR吸附去除內(nèi)毒素，得到不含內(nèi)毒素的上清液，調(diào)節(jié)結(jié)合條件并轉(zhuǎn)移至硅膠柱，離心吸附質(zhì)粒DNA，經(jīng)兩種溶液洗滌去除殘余蛋白質(zhì)和各種雜質(zhì)，最后用Elution Buffer洗脫出質(zhì)粒DNA。